ELISA プレートのクリーニングのヒント

エリサプレート洗浄のヒント

以下のヒントは、エリサプレート洗浄を最適化してデータの品質を向上させるのに役立ちます。 エリサアッセイプロトコルの詳細については、リソースページをご覧ください。

エリサプレートの洗浄方法

エリサアッセイは、研究者がサンプル中に存在する検体の量を測定できる抗体ベースの実験です。 エリサアッセイは、免疫学、神経科学、癌の研究で一般的に使用され、炎症、成長因子、シグナル分子に焦点を当てたさまざまなターゲットを分析します。 主なターゲットには、IL6、IL8、BDNF、VEGF が含まれます。

一般的なタイプのエイサ

研究者が分析物の測定に主に使用した2つの一般的なタイプのELISAアッセイは、サンドイッチエリサと競合エリサ技術です。 サンドイッチ(抗体がプレートに結合)および競合(抗原がプレートに結合)ELISAアッセイには、刺激因子、未結合抗体、低親和性結合の除去を可能にする主要な洗浄ステップと分離された2つの主要な抗体結合ステップが含まれます 複合体。

TMB反応

エリサ実験の出力を測定するために、多数の基質を使用して、最終的な抗体-抗原結合複合体を検出できます。 比色分析、化学発光分析、蛍光分析は、3つの主要な技術です。 一般的にエリサは、サンプルの比色分析に基づく測定を指し、TMB(3,3 '、5,5'-テトラメチルベンジジン)は、ホースラディッシュペルオキシダーゼの存在下で過酸化水素を水に還元するための水素供与体として機能します。 この反応により、溶液の色が青に変わるジイミンが生成されます。 この青色への色の変化は、370および650 nmの分光光度計で読み取ることができます。 この反応を停止するために、硫酸がサンプルに追加され、黄色に変色します。 次に、Eエリサプレートを分光光度計を使用して分析し、450 nmで読み取ります。

エリサ 洗浄ステップの理由

エリサプロトコルの重要なステップは、洗浄ステップです。 バックグラウンドシグナルを減少させるためには、洗浄ステップが重要です。これは、結合していない結合抗体が原因である可能性があり、シグナル対ノイズ比が増加します。 したがって、洗浄ステップにより、抗原と抗体の間で高忠実度の結合相互作用のみが発生することが保証されます。 効率の悪い洗浄が行われると、バックグラウンドレベルが高くなり、データの収集が妨げられ、サンプル間のばらつきが大きくなり、結果が悪くなります。

エリサ洗浄量とパラメーター

エリサプレートに加えられる洗浄バッファーの量は、プレートを効果的に洗浄するために重要です。 ELISAプレートウォッシャーを使用するかマルチチャンネルピペットを使用するかに応じて、プレートを洗浄するときに必要な量に注意してください。 洗浄バッファーの量は、各ウェルに追加されるコーティングバッファーの量よりも多くする必要があります。 たとえば、プレートが100µLのコーティングバッファでコーティングされている場合、200〜350 µLなどのウェルを完全に洗浄するために、より大量の洗浄バッファを追加する必要があります。

エリサプレート洗浄サイクル

洗浄量の後、バックグラウンドの除去を増加させるだけでなく、結合した抗原分析物の不必要な洗浄を防ぐために、洗浄サイクルの数は重要です。 サンプルが過剰に洗浄されると、信号強度が低下し、データの測定と分析が困難になる場合があります。 プロトコルの位置に応じて、1-3-5の洗浄手順が必要になる場合があります。 一般に、プレコーティングされたプレートは、DIYコーティングされたプレートよりも少ない洗浄ステップを必要としますが、これはメーカーとELISAプレートの読み取りに使用される技術に依存する場合があります。

エリサプレート洗浄中のバッファーの吸引–マニュアル

エリサプロトコル中のバッファーの吸引は、残留バッファー、不要な複合体、または抗体を除去するための鍵です。 マルチチャンネルピペットを使用する場合は、ステップ間でマルチチャンネルに新しいピペットチップを置きます。 バッファーを吸引する場合、ウェルの側面や底に触れないように注意しながら、マルチチャンネルをウェルに斜めの角度で配置します。 バッファーを除去した後、プレートを裏返し、ペーパータオルでプレートを軽くたたいて残留バッファーを除去します。 洗浄ステップと緩衝ステップの間にプレートを乾燥させないでください。

Author: Seán Mac Fhearraigh PhD.